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高爾基染色(掃描)

高爾基染色(掃描)

價格:電議 型號:

原產地:中國大陸發布時間:2021/9/15 10:02:13

高爾基染色(掃描)
解決部分較厚的組織聚焦不清晰,制片過程中貼片不平整等導致掃描模糊聚焦不清等問題。

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詳細內容

本產品僅供科研實驗,不得用于醫療或食用。 高爾基染色(掃描)

Golgi-Cox浸染法是研究神經元和膠質細胞正常和非正常形態*有效的方法。使用Golgi技術,在藥物處理過的動物腦中和因神經疾病死亡的病人腦中發現了神經樹突和樹突微小的形態改變。

神經元細胞、膠質細胞、神經樹突棘呈黑色,背景淡黑色或無色

 

送樣運輸要求:

樣本放置于20倍樣本體積的固定液中固定24h以上,常溫運輸送樣。

切勿固定時間過長,切勿冷凍結冰。

 

基于神經元的嗜銀特性,高爾基染色可將神經元的軸突或樹狀突起染成黑色后,使樹突棘可視化,是研究神經元和膠質細胞形態*有效的方法,另一方面,樹突范圍小、突觸棘短而少,意味著發育差,神經傳遞慢。

高爾基染色通過使用重鉻酸鉀和鉻酸鉀,氯化汞作為初步固定劑浸潤組織,鉻鹽和神經細胞中的蛋白質結合,氯化汞通過白色沉淀來標記單個細胞,進一步經過堿處理,使沉淀物變黑(硫化汞)。

 

主要實驗步驟:

1.提前一天等量混合溶液A和B,取上清液進行后續實驗;

2.實驗動物進行深度麻醉,并盡快地從顱骨中取出動物的腦(不能灌注,灌注會造成陰性結果),放入A和B混合液,避光,室溫14天;

3. 14天后,把組織小心移入溶液C,室溫黑暗至少72小時(可長達1周)。24小時后或次日至少更換一次溶液;

4. 組織用紙沾干,稍裹一些OCT,在用干冰降溫的-70度異戊烷里凍硬,鋁紙包好,負80度存放;

5. 用OCT 或水包埋組織,并切片(厚度80-200um);

6. 染色:(整個過程中和蓋蓋玻片之前的任何一步都不要讓切片變干)用雙蒸水沖洗切片兩次,每次4min;把切片置于由1份溶液D,1份溶液E和2份的雙蒸水組成的混合液中10min(堿化,工作液現配現用);蒸餾水沖洗切片兩次,每次4min(蒸餾水應頻繁更換新的);50%,75%和95%的乙醇中對切片進行脫水,每個濃度梯度脫水4min然后在無水乙醇中對切片進行脫水,4次,每次4min(不要延長時間);在二甲苯中透明3次,每次4min,*后用樹脂封片劑對蓋玻片進行封片。

數據的統計主要分析在樹突復雜性(dendritic complexity),包括樹突分支數(number of dendritic branch)、樹突長度(dendritic length)、樹突棘密度(dendritic spine density)等。其中,Sholl 分析(以胞體為圓心,不包括胞體同心圓,計算交點個數)是常用的分析方法。



 

 

更新時間:2023/11/7 12:14:01

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