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免疫熒光檢測(IFC)服務及相關生物學代測服務
免疫熒光檢測(IFC)
分類:免疫熒光檢測分直接法、間接法、夾心法和補體法。
一般試驗方法:
將標記的特異性熒光抗體,直接加在抗原標本上,經一定的溫度和時間的染色,用水洗去未參加反應的多余熒光抗體,室溫下干燥后封片、鏡檢。
如檢查未知抗原,先用已知未標記的特異抗體(抗體)與抗原標本進行反應,用水洗去未反應的抗體,再用標記的抗抗體(第二抗體)與抗原標本反應,使之形成抗原—抗體—抗體復合物,再用水洗去未反應的標記抗體,干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知抗體,則表明抗原標本是已知的,待檢血清為抗體,其它步驟的抗原檢查相同。
直接法一般實驗步驟:
1) 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,10min后棄去,使標本保持一定濕度。
2) 滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其完全覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間(參考:30min)。
3)取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不時振蕩。
4)取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5)立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度,一般可用“+”表示:
?。?)無熒光;(±)極弱的可疑熒光;(+)熒光較弱,但清楚可見;(++)熒光明亮;(+++ --++++)熒光閃亮。待檢標本特異性熒光染色強度達“++”以上,而各種對照顯示為(±)或(-),即可判定為陽性。
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間接法一般實驗步驟:
1)滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于已知抗原標本片,10min后棄去,使標本片保持一定濕度。
2)滴加以0.01mol/L,pH7.4的PBS適當稀釋的待檢抗體標本,覆蓋已知抗原標本片。將玻片置于有蓋搪瓷盒內,37℃保溫30min。
3)取出玻片,置于玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗1-2次,然后按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸5min,不時振蕩。
4)取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,滴加一滴一定稀釋度的熒光標記的抗人球蛋白抗體。
5)將玻片平放在有蓋搪瓷盒內,37℃保溫30min。
6)重復操作3。
7)取出玻片,用濾紙吸去多余水分,滴加一滴緩沖甘油,再覆以蓋玻片。
8)熒光顯微鏡高倍視野下觀察,結果判定同直接法。
服務內容
提供免疫熒光染色服務,并對染色后結果進行顯微照相。
樣品要求
石蠟切片/冰凍切片/細胞爬片。
目的蛋白一抗。
終產品
染色后的切片;
每張切片提供一張照片;
實驗報告。
免疫熒光檢測(IFC)服務及相關生物學代測服務
更新時間:2023/11/7 12:11:20